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CUBIC組織透明化試劑——應(yīng)用實(shí)例更新

發(fā)布時(shí)間: 2024-01-30  點(diǎn)擊次數(shù): 246次

CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技術(shù)CUBIC(Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis)的試劑盒。

該方法由上田泰己教授和洲崎悅生教授等人開發(fā)。

只需將組織浸入試劑盒包含的溶液中,即可對(duì)小鼠大腦和全組織、靈長(zhǎng)類的全腦和甲殼類的全組織進(jìn)行透明化處理和折射率調(diào)整。

該方法有望應(yīng)用于病理學(xué)研究和單細(xì)胞水平中的觀察。

圖片

數(shù)據(jù)提供:

國(guó)立研究開發(fā)法人理化學(xué)研究所上田泰己教授、洲崎悅生教授


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

◆CUBIC特點(diǎn)

● 操作簡(jiǎn)單(只需浸入溶液)

● 可透明化整個(gè)器官

● 小鼠全腦透明化只需兩周


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

可進(jìn)行透明化的組織

小鼠大腦和全組織,靈長(zhǎng)類全腦,魚類、甲殼類、甲蟲等的全組織,骨骼(需進(jìn)行脫鈣處理)


CUBIC Trial Kit試劑盒組成

1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支

2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支

3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支

4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

透明化處理需準(zhǔn)備

▼ 試劑:

1. CUBIC Trial Kit

2. 多聚甲醛(產(chǎn)品編號(hào):160-16061)

3. PBS×1(產(chǎn)品編號(hào):164-25511)

▼ 實(shí)驗(yàn)用具:

1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL錐形管(配合樣品使用)

2. 搖床

3. 用于觀察CUBIC透明化樣品的熒光顯微鏡※和推薦物鏡※※

※共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、光片顯微鏡

※※與折射率 (RI=1.49)相匹配的物鏡。

建議在使用之前咨詢顯微鏡制造商。


 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

◆CUBIC實(shí)驗(yàn)方案事例

透明化實(shí)驗(yàn)方案示例(完整器官)

請(qǐng)注意,組織透明化實(shí)驗(yàn)方案中所用試劑用量、處理時(shí)間需根據(jù)樣品尺寸進(jìn)行調(diào)整。此外,建議在灌注固定后,取出并重新固定樣品。

各個(gè)步驟中使用的試劑量約為12-15 mL,清洗時(shí)建議使用試劑量的5-10倍。

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*每2天更換新溶液

**建議以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 試劑盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用


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圖1.使用Scale CUBIC Solution透明化前后小鼠所有器官的案例

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

免疫組織染色實(shí)驗(yàn)方案示例

腦組織塊的免疫染色案例,詳細(xì)實(shí)驗(yàn)方案請(qǐng)見參考文獻(xiàn)(1)

圖片

*每2天更換新溶液

**分別用以下溶液稀釋抗體

一抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

二抗:0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

***建議以2 : 8、3:7的比例混合 (RI = ~1.49) 試劑盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。

圖片
圖2.使用CUBIC處理的腦組織塊經(jīng)三維免疫染色后單光子顯微鏡成像

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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